Page 184 - 北京京煤集团总医院第十届·2022学术年会论文集

北京京煤集团总医院 第十届·2022 学术年会论文集

缺乏病原学确诊依据的肺结核临床诊断难度更大、更容易出现误诊和过诊的情况 [6-8] 。

结核分枝杆菌细菌学、分子生物学和病理学检查阳性是肺结核的确诊依据 [9-10] 。目前肺结核

的细菌学诊断主要依靠痰抗酸染色及结核分枝杆菌培养。随着诊断技术的不断提高，利福平

耐药实时荧光定量核酸扩增技术（简称“Xpert”）、交叉引物核酸恒温扩增（CPA）等分子生

物学诊断技术广泛应用于临床，但对于煤工尘肺并发涂阴肺结核患者诊断的敏感度、特异度
各有不同。现有的结核病实验室诊断金标准不能满足临床早期、快速诊治的需要，开发灵敏

度高、耗时短、成本低廉并易普及的检测方法成为大势所趋 [11] 。有研究结果表明，Xpert

MTB/RIF 在抗酸染色涂片阴性、分枝杆菌生长指示管（Mycobacteria growth indicator tube，

MGIT）液体培养法阳性的患者和人类免疫缺陷病毒感染者中的检测敏感性并不高 [12] 。本研

究以临床综合诊断为标准，分析 MGIT 960 培养、CPA 和 Xpert 检测在煤工尘肺并发涂阴肺

结核患者中的诊断效能。

1. 资料和方法

1.1 研究对象：选取 2017 年 1 月至 2021 年 6 月在北京京煤集团总医院诊断的 198 例疑

似煤工尘肺并发涂阴结核患者作为研究对象；均为男性，年龄 39～88 岁。平均年龄为

（65.3±10.76）岁，尘肺病诊断依据《中华人民共和国国家职业卫生标准》 [13] 进行，结核病

[9]
[10]
诊断根据 《WS288-2017 肺结核诊断》 和 《 WS196-2017 结核病分类》 进行诊断。留取
患者晨起痰合格标本 3～5ml，各取 1ml 分别加入到 3 个前处理管中，分别进行 MGIT 960

培养、CPA、Xpert 检测。
1.2 研究方法

1.2.1 试验材料：CPA 检测的结核分枝杆菌核酸检测试剂盒（恒温扩增-试纸条法；

EasyNAT TB-CPA)，购自杭州优思达生物技术有限公司，产品标准编号为 YZBZ/国 0528-

2
2014；最低检出量：10 个菌/ml 国家参考品（S2）。培养采用 BACTEC MGIT 960 液体培养
（简称“MGIT 960 培养”）系统，由美国 BD 公司生产。Xpert 检测系统及其配套试剂盒

（Cartrige 反应盒）购自美国 Cepheid 公司，产品技术编号为国械注进 20173406215；

1.2.2 CPA：采用 MTB 核酸检测试剂盒，对临床采集的痰标本进行样本处理及 DNA 提

取、恒温扩增、检测。首先，标本经过液化及洗涤后进行 DNA 提取，在含沉淀物的离心管

中加入 40µlDNA 提取液，震荡或移液器吹打混匀，沸水浴（95～100℃）10min，冷却至室

温；以 12000r/min、离心半径 5.7cm，离心 10min，吸取上清液作为模板备用。然后，设置

阳性及阴性对照。管中加入 15µl 复溶缓冲液，再滴加 20µl 石蜡油，室温静置 2～3min。取

1 管反应液加入 4µl ddH2O 混匀，作为阴性对照。在其他反应液中加入 DNA 模板或直接吸

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